- 1. 연구개발과제의 개요
- 2. 국내외 기술개발 현황
- 3. 연구개발수행 내용 및 결과
- 3.1 실험재료 및 방법
- 3.1.1 균주 및 균주 보존
- 3.1.1.1 균주
- 3.1.1.2 균주보존
- 3.1.2 배지
- 3.1.2.1 Agar 배지
- 3.1.2.2 전배양 배지
- 3.1.2.3 생산 배지
- 3.1.3 배양 방법
- 3.1.3.1 선별 균주 배양
- 3.1.3.2 1차 전배양
- 3.1.3.3 2차 전배양
- 3.1.3.4 Flask 배양
- 3.1.3.5 5L 발효조 배양
- 3.1.4 분석 방법
- 3.1.4.1 균체량(PMV)
- 3.1.4.2 Total sugar(T.S)
- 3.1.4.3 Reducing sugar(R.S)
- 3.1.4.4 타이로신
- 3.1.5 균주 개량 방법
- 3.1.5.1 변이원 처리
- 3.1.5.2 변이주 선별
- 3.1.5.3 변이주 보존
- 3.2 실험결과 및 고찰
- 3.2.1 타이로신 정량 방법 확립
- 3.2.2 타이로신 생산 균주의 특성 연구
- 3.2.3 타이로신 생산 균주 개량
- 3.2.3.1 UV 변이 처리에 의한 사멸률 조사
- 3.2.3.2 고역가의 타이로신 생산균주 선별
- 3.2.3.3 균주 개발 요약
- 3.2.4 균주의 보존 방법 확립
- 3.2.5 기본 배양 배지 및 조건 확립
- 3.2.5.1 균주 선별 배지
- 3.2.5.1.1 Agar 배지의 선별
- 3.2.5.1.2 Agar 배지의 최적화
- 3.2.5.2 전배양
- 3.2.5.2.1 전배양 배지
- 3.2.5.2.2 전배양 기간
- 3.2.6 타이로신 발효배지 개발
- 3.2.6.1 발효배지의 선별
- 3.2.6.2 탄소원의 영향
- 3.2.6.2.1 Corn meal의 영향
- 3.2.6.2.2 다양한 탄소원들의 영향
- 3.2.6.2.3 탄소원을 oil로 대체하였을 때의 영향
- 3.2.6.2.4 당밀 농도의 영향
- 3.2.6.3 질소원의 영향
- 3.2.6.3.1 다양한 질소원들의 영향
- 3.2.6.3.2 질소원 혼합첨가의 영향
- 3.2.6.3.3 질소원 비율의 영향
- 3.2.6.4 Oil의 영향
- 3.2.6.5 무기물의 영향
- 3.2.6.5.1 KCI의 영향
- 3.2.6.5.2 Trace minerals의 영향
- 3.2.6.5.3 CaCO₃의 영향
- 3.2.6.5.4 KH₂PO₄의 영향
- 3.2.6.5.5 결론
- 3.2.7 타이로신 발효 생산을 위한 발효 조건 최적화
- 3.2.7.1 Flask
- 3.2.7.1.1 배양 부피
- 3.2.7.1.2 교반 속도
- 3.2.7.2 5L 발효조
- 3.2.7.2.1 전배양 단계에 따른 영향
- 3.2.7.2.2 Dissolved oxygen(DO)의 영향
- 3.2.7.2.3 교반속도의 영향
- 3.2.7.2.4 온도의 영향
- 3.2.7.2.5 접종량의 영향
- 3.2.7.2.6 멸균 시간에 따른 영향
- 3.2.7.2.7 결론
- 3.2.8 1kL 발효조를 이용한 타이로신 생산 발효
- 3.2.8.1 균주 activation
- 3.2.8.2 1차 종배양
- 3.2.8.3 2차 종배양
- 3.2.8.4 본배양
- 3.2.9 정제회수 공정 개발
- 3.2.9.1 배양액 보관온도
- 3.2.9.2 균체 분리 공정
- 3.2.9.2.1 균체 분리 공정
- 3.2.9.2.2 발효액 전처리
- 3.2.9.3 농축 공정
- 3.2.9.3.1 타이로신 열 안정성
- 3.2.9.3.2 농축 공정
- 3.2.9.4 건조 공정
- 3.2.9.4.1 고형분 농도
- 3.2.9.4.2 분무 건조
- 3.2.9.4.3 부형제
- 3.2.10 제제화 및 안정성 실험
- 3.2.10.1 제제화 실험
- 3.2.10.2 안정성 실험
- 3.2.11 우량균주의 타이로신 생산성 확인
- 3.2.11.1 TS 3 균주
- 3.2.11.2 H 3 균주
- 3.2.12 시험 생산
- 3.2.12.1 6 kL 발효조 실험
- 3.2.12.2 34 kL 발효조 실험
- 3.2.12.3 제품화 실험
- 3.2.12.3.1 발효액 전처리
- 3.2.12.3.2 균체 및 고형분의 제거
- 3.2.12.3.3 제품의 건조
- 3.2.12.3.4 제품의 원가
- 4. 목표달성도 및 관련분야에의 기여도
- 5. 연구개발결과의 활용계획
- 5.1 타연구에 응용
- 5.1.1 고농도 생산 균주의 개발
- 5.1.2 발효 공정 개발 및 Scale-up
- 5.1.3 분리 정제
- 5.1.4 제품화 공정
- 5.2 추가 연구의 필요성
- 5.2.1 균주의 개량
- 5.2.2 정제 방법 연구
- 5.3 기업화(상품화) 추진 방향
- 5.3.1 제품의 Field test
- 5.3.2 제품의 허가 취득
- 5.3.3 정제 설비의 보완 및 신규 설치
- 5.3.4 본생산 및 판매
- 6. 참고문헌
